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RT-PCR実験開始!

2012.01.28 [大阪] 住吉高等学校

※2月6日にグラフを追加しました

1月21日(土)より、RT-PCR実験を開始しました!

明日、1月28日(土)には前回の実験での結果から、実験の問題点を検証、改善するための実験を行います。

 

今回は、なぜRT-PCRを行うことになったのかについて書いていきたいと思います。

 

コンソーシアムでは発表したのですが、私たちはダイコンの辛み成分は、

葉を傷つけることによって増加するということを発見しました。

これがそのグラフです。

 

2011年12月25日測定ダイコン応答反応(3個体の中央値、耐病総太り).jpg 

今まで何度も同じ実験を繰り返してきて、すべてのデータがこのように(ダイコンの種類によって誤差があるようですが)6日目をピークにして一時的にITC量が増加します。

このグラフはそれらの中で最新のもので、各条件で3検体ずつ採取して、それらのITC濃度の中央値を計算して書いたグラフです。

 

このことから、私たちは、ダイコンが食害に応答してITC又はそのもととなる物質の量を変化させるのはまず間違いないと考えています。

 

ですが、このITCの測定値のグラフだけでは証拠として不十分であると考えた私たちは、生物の代謝を見るうえで最も信頼がおけるであろう"遺伝子の発現を観測する"という方法でダイコンの応答反応を証明しようと考えました。

 

その具体的な方法が"RT-PCR法を用いて"m-RNAを定量"する方法です。

 

 

まずはITCがどのようにして生成されるかということを紹介しましょう。

 

ITCは細胞内の別々の場所に存在する "配糖体;グルコシノレート" と "酵素;ミロシナーゼ" が細胞破壊によって混ざり合い反応することによって生成されます。

 

ミロシナーゼはあくまで酵素なので、配糖体のグルコシノレートの量がITC量を決定する要因であると考えました。

 

そこでグルコシノレートの合成にかかわる遺伝子を調べてみたところ、

PMG1説明図.jpg

このようにPMG1という遺伝子が作り出す転写因子=たんぱく質が、グルコシノレートの合成にかかわる一連の酵素を作り出す遺伝子のスイッチを"オン"にする、"メインスイッチ"のような働きをしていることがわかりました。

 

そこで、今度はたんぱく質の合成のところを詳しく見ると、

 

タンパク質合成図.JPG

ということで、PMG1由来のm-RNAを定量することでグルコシノレートの合成量の変化がわかる!

それを同じように比較することでダイコンの応答反応の証明ができる!

 

と、考えから私たちは実験を進めています。

 

次回は結果を乗せたいと思いますが、きょうはこの辺で、、、、、

 

では、また!

 

 

 

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ご無沙汰しております(-_-;)

2011.08.01 [大阪] 住吉高等学校

ご無沙汰しております

住吉高校の広報宣伝部長です。

 

かれこれ1年ぶりの更新(-_-;)

これにはちょっとした訳がありまして・・・・

実は私、去年の8月30日から今年の6月21日までの約10ヶ月間イタリアに留学してました。

 

その間共同研究者の愉快な会長(副会長から見事会長になりました)と部長に更新してもらえるように言っていたのですが・・・

2人で研究からブログまでこなすのはきつかったようで、だれも更新する人がいないまま月日が流れ・・・

至る今(-_-;;)

これから再開していきますのでみなさんどうぞよろしくお願いします  m(_ _)m

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住吉高等学校の「平成22年度 ダイコン多様性研究」の研究成果レポートをまとめました。

各研究テーマごとに分かれていますので、下記からダウンロードしてください。

 

 

また、これらの研究レポートは当コンソーシアムの「平成22年度 実施報告書」の中にも掲載されています。

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住吉高等学校の「平成21年度 ダイコン多様性研究」の研究成果レポートをまとめました。

各研究テーマごとに分かれていますので、下記からダウンロードしてください。

 

 

また、これらの研究レポートは当コンソーシアムの「平成21年度 実施報告書」の中にも掲載されています。

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やったぜ!!!!

2010.01.25 [大阪] 住吉高等学校

こんばんは!

広報宣伝部長です!!!

なんで今日はこんなに「!」が多いのかというと、

なんと、はっきりとした阻止円が現れたのです!!!!! 

 

今回(1月23日~25日)の実験方法がこちら!!

1,使用したダイコンは市販の辛み大根と丸ダイコン、そして市販の練りワサビ

2,ダイコンおろしを培地に乗せた。ワサビも直接培地に乗せた

3,揮発を防ぐためにラップをかぶせた。

そして、

4,培地の養分を通常の10分の1にした。

です。

そして、結果がこちら!!!

P1050224.JPG

↑丸ダイコン

P1050221.JPG

↑辛みダイコン

P1050227.JPG

↑ワサビ

 

今回は各3つの培地で行いましたが、すべての培地で阻止円が見られ、その大きさは

辛みダイコン  1.3cm / 1.25cm / 1cm  

丸ダイコン   1cm / 1cm / 1cm

ワサビ      大腸菌が生えなかった。

 

今回の実験で、大腸菌の培地は養分を減らせば阻止円が出やすくなる。

ということが分かりました。

今回はダイコンおろしを培地に直接置きましたが、次回はペーパーディスクで成功させたいです。

また、今回は阻止円が強すぎてワサビでは測定ができなかったので、

ちょうどよい養分の量を模索していきます。

 

これだけで満足せずに、

各種ダイコンの抗菌作用の違いについてひきつずき実験をおこなっていきます!!!

 

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